| A.S. Ostiamare Lido Calcio | Roma | 1945 | — |
| AC Carpi SSD | Carpi | 1909 | Stadio Alberto Braglia |
| AC Perugia Calcio | Perugia | 1905 | Stadio Renato Curi |
| Arzachena Academy Costa Smeralda Società Sportiva Dilettantistica | Arzachena | 1964 | — |
| AS Gubbio 1910 | Gubbio | 1913 | Stadio Pietro Barbetti |
| Associazione Calcio Gozzano | Gozzano | 1 aprile 1920 | Stadio Alberto Allesina |
| Associazione Sportiva Giana Erminio | Gorgonzola | 1909 | stadio comunale Città di Gorgonzola |
| Associazione Sportiva Lupa Castelli Romani | Roma | 2013 | — |
| Atalanta Bergamasca Calcio U23 | — | 21 giugno 2023 | — |
| Benevento Calcio | Benevento | 1929 | Stadio Ciro Vigorito |
| Calcio Foggia 1920 | Foggia | 1920 | Stadio Pino Zaccheria |
| Calcio Lecco 1912 | Lecco | 1912 | Stadio Rigamonti |
| Delfino Pescara 1936 | Pescara | 1936 | stadio Adriatico-Giovanni Cornacchia |
| FC Crotone | Crotone | 1923 | Stadio Ezio Scida |
| FC Pro Vercelli 1892 | Vercelli | 1990 | Stadio Silvio Piola |
| Feralpisalò | Salò | 2009 | Stadio Lino Turina |
| Fermana Football Club | Fermo | 1920 | stadio Bruno Recchioni |
| Football Club Internazionale Milano U23 | Milano | 2025 | Stadio Brianteo |
| Football Club Legnago Salus | Legnago | 1921 | — |
| Football Club Rieti 1936 | Rieti | 1936 | Stadio Centro d'Italia-Manlio Scopigno |
| Football Club Trapani 1905 | Trapani | 1905 | Stadio polisportivo provinciale di Trapani |
| Gruppo Sportivo Trancerie Mossina | Guastalla | 1941 | — |
| Guidonia Montecelio 1937 Football Club | Guidonia Montecelio | 2024 | Stadio comunale |
| Juventus Next Gen | Torino | 2018 | Stadio Giuseppe Moccagatta |
| Lucchese 1905 | Lucca | 2019 | Stadio Porta Elisa |
| Milan Futuro | — | 27 giugno 2024 | — |
| Novara FC | Novara | 2021 | Stadio Silvio Piola |
| Nuova Ternana 1925 | Terni | 1925 | Stadio Libero Liberati |
| Società Sportiva Calcio Ancona | Ancona | 2017 | Stadio del Conero |
| Spezia Calcio | La Spezia | 2008 | Stadio Alberto Picco |
| SSC Bari | Bari | 1908 | Stadio San Nicola |
| Ternana Calcio 2020-2021 | Terni | — | Stadio Libero Liberati |
| Unione Sportiva Catanzaro 1929 2020-2021 | Catanzaro | — | stadio Nicola Ceravolo |
| Unione Sportiva Grosseto 1912 2020-2021 | — | — | Stadio Carlo Zecchini |
| Unione Sportiva Pianese | Piancastagnaio | 1930 | — |
| Unione Sportiva Vibonese Calcio 2020-2021 | Vibo Valentia | — | stadio Luigi Razza |
| US Livorno 1915 | Livorno | 2021 | Stadio Armando Picchi |
| US Salernitana 1919 | Salerno | 2011 | Stadio Arechi |
| US Triestina Calcio 1918 | Trieste | 1918 | Stadio Nereo Rocco |
| US Vibonese Calcio | Vibo Valentia | 1928 | — |
| Vicenza Calcio | Vicenza | 1902 | Stadio Romeo Menti |
| Virtus Verona | Verona | 1921 | — |